細胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細胞中供給細胞營養(yǎng)和促使細胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。無血清培養(yǎng)基不加動物血清,在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入細胞生長有效因子,激素等。
有許多細胞系是相對容易適應(yīng)無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基的,而對環(huán)境變化相對敏感的其它細胞則難以適應(yīng)變化,這就需要更為專業(yè)的方法來讓細胞適應(yīng)環(huán)境變化。
而根據(jù)細胞系的特性,有兩種方法可使細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。第一種方法是連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法;另一種方法是直接適應(yīng)。
在適應(yīng)過程中,細胞通常對PH和溫度變化較為敏感。讓細胞在每個階段都至少有一個適應(yīng)過渡期。
細胞存活率和細胞密度
細胞在對數(shù)生長期中期快速分裂,且在適應(yīng)過程開始時,存活率大于90%。這一點至關(guān)重要。當(dāng)細胞需傳代時,建議采用1:2或1:3的小傳代比例,以維持更高的細胞密度,同時提供隔絕期間可能有助于細胞的細胞生長因子。
當(dāng)細胞適應(yīng)新的培養(yǎng)條件時,在增大細胞傳代密度。
細胞生長
如果在適應(yīng)過程中,細胞停止了生長,則需讓細胞有更多的時間來適應(yīng)培養(yǎng)基組合。例如,在方法1的階段4,向無血清培養(yǎng)基添加少量的血清(1-3%)。這樣有助于細胞更容易地適應(yīng)新的培養(yǎng)基。
然后,在幾個過渡期內(nèi),緩慢地減少血清量,直至學(xué)清量為0。
懸浮培養(yǎng)物
一些公司的無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基不含血清中所發(fā)現(xiàn)的細胞貼壁因子。在一段過渡期內(nèi),貼壁細胞將開始離開表面,并成為懸浮細胞系開始生長。細胞也可能因適應(yīng)而發(fā)生形態(tài)變化。監(jiān)測細胞的生長速度,只要細胞能夠與新系統(tǒng)相融合,任何形態(tài)變化都不重要。
細胞叢
在適應(yīng)于無血清培養(yǎng)期間,細胞容易形成叢。傳代培養(yǎng)時,將叢輕輕折斷,使其分散開。將培養(yǎng)物從靜止細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)轉(zhuǎn)移到可旋轉(zhuǎn)錐形瓶內(nèi),這樣可能會有助于防止細胞叢的形成。
抗生素
由于血清蛋白易于粘合到抗生素上,因此,不建議在無血清適應(yīng)過程中使用抗生素。如不存在血清蛋白,則抗生素水平可能會對細胞產(chǎn)生毒性。
預(yù)防措施
確保在開始適應(yīng)過程前,儲存有大量原培養(yǎng)基的細胞。如果細胞沒有存活到下一階段,則在整個過程中保存每一階段使用的培養(yǎng)瓶。